酶聯(lián)免疫吸附實驗是酶免疫測定技術(shù)中應(yīng)用*的技術(shù)。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應(yīng)板)表面,使酶標記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。該技術(shù)可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等,具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優(yōu)點。
一、基本概念
1、免疫:籠統(tǒng)地概括起來,免疫就是人和動物機體防御、排除外來物質(zhì)(異物)進人體內(nèi),同時識別和清除體內(nèi)死亡、變性物質(zhì)和平定體內(nèi)叛亂分子突變細胞,以保護和穩(wěn)定自身的防護機制。
2、抗原:抗原是指那些能夠誘導機體的免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答,產(chǎn)生抗體和致敏效應(yīng)淋巴細胞,并在體內(nèi)外與之特異性結(jié)合,發(fā)生免疫反應(yīng)的物質(zhì)。
3、抗體:是能與相應(yīng)的抗原專一性結(jié)合的蛋白質(zhì)分子,和機體其他生物大分子一樣是細胞的產(chǎn)物,分泌到體液中或表現(xiàn)在細胞表面上。
4、抗原、抗體反應(yīng):抗原和抗體在體外的反應(yīng)亦稱血清學反應(yīng)。這類反應(yīng)可借助免疫學方法進行檢測。
二、酶聯(lián)免疫吸附實驗基本原理:
?、倏乖蚩贵w能吸附到固相載體表面,并保持其免疫學活性;
②抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性;
?、勖笜丝贵w與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例。
以雞敗血支原體(Mg)抗體檢測為例:試驗用Mg抗原包被96孔板。被檢樣品加入包被孔后的孵育階段,血清樣品中的特異性Mg抗體與包被的抗原反應(yīng)形成復合物,經(jīng)過洗滌,為結(jié)合的物質(zhì)被洗掉,微孔加入酶標抗體,酶標抗體可以與吸附在包被孔內(nèi)的雞抗體結(jié)合。反應(yīng)后進行洗滌,為結(jié)合的酶標抗體被洗去。加入酶底物后的顏色反應(yīng)與血清中的Mg抗體的數(shù)量直接相關(guān)。